实验秘籍密不外传：ELISA之“包被”

今天，小编就先讲讲试验的第一步，有关“包被”的那些事！

包被

将抗原抗体消融,并将其吸附在聚苯乙烯等固相载体上,这个过程就是固相化，也就是包被。包被是ELISA试验的第一步，操作简单，但耗时较长，有需求时应确定最好包被浓度。

包被缓冲液配方

在此罗列两种常常应用的包被缓冲液配方：

0.05mol/L碳酸盐缓冲液(pH9.6)

0.02mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.4)

包被原理

ELISA所用的包被抗体抗原普通是卵白质，受卵白质的份子量、等电点、浓度等的影响，载体对不一样卵白质的吸附能力是不一样的。应应用pH大于卵白的PI的包被缓冲液包被，一是缘由是卵白质与酶标板的联合主如果靠疏水用处的物理吸附。而缓冲液的PH略大于包被卵白的PI，有益于卵白质疏水键的恰当裸露。二是缘由是酶标板聚苯乙烯表面裸露的主如果C－H键，而缓冲液的PH略大于包被卵白的PI，能够使卵白质带上负电荷，有益于卵白质与酶标板的稳固联合，提升包被效率。

包被过程

采取包被缓冲液消融抗体或抗原，参加过量于聚苯乙烯板或其它固相载体中，4℃留宿包被或许37℃包被2h，包被的最适浓度随固相载体和包被物的性质变化，普通卵白质的包被浓度为1-5ug/ml，有需求时应确定最好包被浓度。

4℃包被留宿冰箱

37℃包被2h温育箱

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